Kereta api khas yang berjalan dari Antartika ke hutan mungkin terhenti, dan sebabnya disebabkan oleh kemerosotan trek keretapi. Haiwan-haiwan itu, takut kehilangan satu-satunya pengangkutan yang membolehkan mereka pergi, berpaling kepada Diego untuk mendapatkan bantuan di Go Diego Go! Penyelamat kereta api Diego. Anak lelaki itu bersedia membantu, yang melibatkan anda dalam pelaksanaan rancangannya. Ia melibatkan pembaikan jalan, tetapi pertama-tama anda perlu meletakkan semua haiwan di dalam kereta. Penumpang bersetuju untuk melakukan perjalanan hanya dalam syarikat mereka sendiri, jadi ada kereta yang berasingan untuk penguin, rusa, beruang, dan sebagainya. Apabila semua haiwan telah diletakkan, kereta api akan memulakan perjalanannya dan sebelum setiap perhentian anda mesti memasang jalan seperti teka-teki dengan menjadikan bahagian individu di Go Diego Go! Penyelamat kereta api Diego.
